小鼠（Mouse）氧化三甲胺（TMAO） ELISA检测豪运国际本豪运国际仅供科研实验产品货号：DM-K137产品规格：48/96TELISA（酶联免疫吸附测定，Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）的核心原理，是抗原与抗体的特异性免疫结合 + 酶催化底物的显色反应，通过颜色深浅定量 / 定性判断待测物浓度。一、ELISA 整体核心原理特异性识别利用抗原（Ag）与抗体（Ab）一对一特异性结合，只抓样本里的目标分子，不抓无关杂质，保证检测特异性。固相化（固定在板上）把抗原或抗体预先包被在 96 孔酶标板的固相载体表面，让免疫反应在固相界面发生，方便后续洗涤去掉未结合物质。酶标记与信号放大用酶（常用辣根过氧化物酶 HRP、碱性磷酸酶 AP）标记二抗或检测抗体。酶本身不参与免疫结合，但能高效催化底物，一个酶分子可以催化大量底物分子显色，实现信号放大，让微量目标也能被检出（高灵敏度）。显色与定量加入酶的特异性底物，酶催化底物发生化学反应，产生有色产物。颜色深浅 → 与酶的量成正比 → 与结合的抗原 / 抗体量成正比 → 与样本中待测物浓度成正比。用酶标仪读取吸光度（OD 值），通过标准曲线计算待测物浓度。一句话总结：用抗原抗体特异性结合 “抓住” 目标，用酶催化显色 “放大信号”，用颜色深浅 “读浓度”。二、四种＊常用 ELISA 方法原理双抗体夹心法 —— 测大分子抗原（蛋白、细胞因子、激素等）＊常用，适合分子量较大、有多个抗原表位的蛋白抗原。步骤逻辑：1. 包被：酶标板上包被捕获抗体（Ab1）2. 封闭：封闭非特异性位点，减少背景3. 加样：加入样本，待测抗原（Ag） 与 Ab1 结合4. 加酶标抗体：加入酶标记的检测抗体（Ab2–酶），Ab2 结合抗原上另一个表位，形成 “Ab1–Ag–Ab2–酶” 夹心结构5. 洗涤：去掉未结合的酶标抗体6. 加底物：酶催化底物显色7. 读数：OD 值越高 → 抗原浓度越高特点：特异性高（两个抗体识别抗原不同表位）灵敏度高适用：细胞因子、肿瘤标志物、激素、病毒抗原等大分子蛋白2. 间接法 ELISA —— 测样本中的抗体（如病毒抗体、自身抗体）主要用于检测人 / 动物血清中的特异性抗体，比如新冠抗体、乙肝表面抗体、自身免疫抗体等。步骤逻辑：1. 包被：酶标板包被已知纯化抗原（Ag）2. 封闭3. 加样：加入样本，待测抗体（Ab1，一抗） 与抗原结合4. 加酶标二抗：加入酶标记的抗物种二抗（如酶标羊抗人 IgG），二抗识别一抗的 Fc 段5. 洗涤6. 加底物显色7. 读数：OD 值越高 → 样本中特异性抗体浓度越高特点：二抗通用，只要是同一物种抗体，可用同一酶标二抗成本低、通量高适用：血清抗体筛查、感染后抗体水平监测3. 竞争法 ELISA —— 测小分子抗原（药物、小分子激素、多肽等）适合分子量小、只有一个抗原表位，无法用 “夹心” 的小分子。两种常见形式（原理一致，方向相反）：形式 A：抗体包被，酶标抗原竞争1. 包被：包被特异性抗体（Ab）2. 加样：同时加入样本抗原（Ag） + 固定量酶标抗原（Ag–酶）3. 竞争：Ag 和 Ag–酶 竞争结合有限的抗体位点4. 洗涤5. 显色读数：(1) 样本中 Ag 越多 → 结合的 Ag–酶越少 → 显色越浅 → OD 越低(2) 样本中 Ag 越少 → 结合的 Ag–酶越多 → 显色越深 → OD 越高特点：信号与浓度成反比适合小分子：多肽、类固醇激素、毒品 / 药物残留、霉菌毒素等4.直接法 ELISA —— 简单快速，少用在常规定量直接用酶标一抗结合抗原，步骤＊少，但灵敏度和通用性差，多用于快速定性。步骤逻辑：1. 包被抗原2. 加样 + 直接加入酶标一抗3. 洗涤、显色、读数特点：步骤少、快灵敏度较低，每种抗原要单独酶标一抗，成本高多用于快速试纸 / 定性筛查，少用于精密定量三、关键组分在原理中的角色1. 包被原 / 抗体：锚定反应，提供特异性结合位点2. 酶标抗体 / 抗原：免疫结合 + 信号放大3. 底物：把酶活性转化为可检测的光信号（颜色）4. 洗涤液：去掉未结合物，降低背景，提高信噪比5. 封闭液：封闭板上非特异性位点，减少非特异吸附6. 标准品：建立浓度–OD 标准曲线，用于定量计算四、一句话区分四种方法1. 测大分子抗原 → 双抗体夹心法（OD 越高，浓度越高）2. 测样本抗体 → 间接法（OD 越高，抗体越高）3. 测小分子抗原 → 竞争法（OD 越高，浓度越低）4. 快速简单定性 → 直接法豪运国际的组成ELISA 实验常见问题与原因（快速排查）整体背景高、OD 普遍偏高1. 洗涤不彻底2. 封闭不足3. 酶标抗体浓度过高4. 孵育温度过高 / 时间过长5. 底物显色过久信号偏低、标准曲线不起来试剂失效、酶失活孵育时间不足、温度偏低洗涤过度底物失效或配制错误样本中靶标浓度过低重复性差、孔间差异大1. 加样不准、枪未校准2. 洗涤不均、拍干不彻底3. 孵育时受热不均、蒸发4. 酶标板本身质量差标准曲线不成梯度1. 标准品稀释错误2. 标准品反复冻融、失活3. 加样顺序混乱、时间不一致4. 底物失效实验关键原则（记住这几条，ELISA 基本稳）1. 洗涤是灵魂：宁可多洗，不可少洗；必须拍干。2. 温度与时间严格控制：差 5 分钟、差 2℃，结果就可能飘。3. 试剂现配现用：底物、酶标抗体、标准品稀释液＊敏感。4. 复孔是底线：至少复孔，减少随机误差。5. 全程避光：底物、酶标抗体尽量避光操作。相关产品：DM-K299小鼠（Mouse）基质金属蛋白酶9（MMP-9）ELISA检测豪运国际DM-K300小鼠（Mouse）神经丝蛋白L（NFL）ELISA检测豪运国际DM-K301小鼠（Mouse）泛素羧基端酯酶L1（UCHL1）ELISA检测豪运国际DM-K302小鼠（Mouse）免疫球蛋白 E（IgE）ELISA 检测豪运国际DM-K303小鼠（Mouse）异柠檬酸脱氢酶（IDH）ELISA检测豪运国际DM-K304小鼠（Mouse）异柠檬酸脱氢酶1（IDH1）ELISA检测豪运国际
贝类（Shellfish）离子（Ca2+）ELISA检测豪运国际本豪运国际只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理豪运国际采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被钙离子（Ca2+）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙离子（Ca2+）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 豪运国际保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。豪运国际组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、15、30、60、120、240 pg/mL试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 豪运国际性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0pg/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 豪运国际仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
人（Human）窖蛋白-1（CAV1）ELISA检测豪运国际产品货号：DM-H147产品规格：【48T/96T】检测原理：酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的生物化学分析技术，广泛应用于检测蛋白质、抗体、激素、药物等生物分子。其检测原理主要基于以下几个关键步骤：1. 抗原-抗体特异性结合ELISA的核心是利用抗原与抗体之间的特异性结合。抗原和抗体之间通过互补的结构相互识别并结合，这种结合具有高度的特异性和亲和力。例如，如果要检测某种特定的蛋白质（抗原），就需要使用针对该抗原的特异性抗体。2. 固相化技术ELISA实验中，抗原或抗体通常被固定在固相载体上（如塑料微孔板）。这种固相化过程使得抗原或抗体能够稳定地吸附在微孔板表面，便于后续的反应和检测。固相化的抗原或抗体被称为“捕获相”，而加入的样本中的抗原或抗体则被称为“检测相”。3. 酶标记技术为了实现检测信号的放大和可视化，ELISA中通常使用酶标记的抗体或抗原。常用的酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。酶标记的抗体或抗原与固相化的抗原或抗体结合后，酶会与底物反应，产生可检测的信号（如颜色变化或荧光信号）。4. 底物反应与信号检测酶与底物反应后，会产生颜色变化或荧光信号。这种信号的强度与样本中目标分子的浓度成正比。例如，辣根过氧化物酶（HRP）可以催化过氧化氢分解，使无色的底物（如TMB）变为蓝色，加入酸终止反应后变为黄色，通过分光光度计测量吸光度即可定量分析目标分子的浓度。5. 检测模式ELISA主要有以下几种检测模式：直接ELISA：抗原固定在固相载体上，加入酶标记的抗体与抗原结合，通过底物反应检测信号。间接ELISA：抗原固定在固相载体上，先加入未标记的特异性抗体，再加入酶标记的二抗（针对一抗的抗体），通过底物反应检测信号。夹心ELISA：固相载体上固定捕获抗体，加入样本中的抗原，再加入酶标记的检测抗体，通过底物反应检测信号。夹心ELISA是检测蛋白质等大分子常用的方法。竞争ELISA：样本中的抗原与固相载体上的抗原竞争结合酶标记的抗体，通过检测酶标记抗体的结合量来推断样本中抗原的浓度。6. 定量分析ELISA的检测结果可以通过标准曲线进行定量分析。标准曲线是通过一系列已知浓度的标准品进行检测，绘制吸光度（或荧光强度）与浓度的关系曲线。根据样本的吸光度或荧光强度，通过标准曲线可以计算出样本中目标分子的浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 豪运国际保存在2-8℃，使用室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用充分摇匀豪运国际组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。 洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤 豪运国际性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。5. 有效期：6个月免责声明1. 豪运国际仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
人（Human）丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶17A（STK17A）ELISA检测豪运国际本豪运国际只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理豪运国际采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶17A（STK17A）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的人丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶17A（STK17A）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 豪运国际保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。豪运国际组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管100ng/mL样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。以下标曲图例仅供示例，非本豪运国际实测值。 豪运国际性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0 ng/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 豪运国际仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
小鼠（Mouse）铁蛋白重链1 (FTH1) ELISA检测豪运国际小鼠铁蛋白重链 1（FTH1）ELISA 检测豪运国际是一种用于检测小鼠体内 FTH1 含量的常用工具，以下是其详细介绍：检测原理：通常采用双抗体夹心 ELISA 法。微孔酶标板预先包被有针对小鼠 FTH1 的特异性抗体。加入待检测的样品后，若样品中含有 FTH1，它会与包被抗体结合。然后加入生物素化的检测抗体，该抗体也会与 FTH1 结合，形成抗体 - FTH1 - 生物素化抗体的复合物。接着加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，亲和素与生物素特异性结合。经过洗涤步骤，去除未结合的物质。＊后加入底物溶液，HRP 催化底物显色，颜色的深浅与样品中 FTH1 的浓度成正比。通过酶标仪测定吸光度值，与标准曲线比较，即可计算出样品中 FTH1 的浓度。豪运国际组成：以 96T 豪运国际为例，一般包括预包被抗体的微孔酶标板（8 孔 ×12 条）、标准品（2 瓶）、浓缩生物素化检测抗体（100×，120μL）、浓缩 HRP 标记亲和素（100×，120μL）、样品稀释液（1 瓶，20ml）、生物素化检测抗体稀释液（1 瓶，14ml）、HRP 标记亲和素稀释液（1 瓶，14ml）、浓缩洗涤缓冲液（25×，30ml）、底物试剂（1 瓶，10ml）、终止液（1 瓶，10ml）等。样本类型：常见的样本类型包括血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液等生物体液。操作步骤：一般先进行标准品的稀释与加样，以及待测样品的准备与加样。然后进行温育，用封板膜封板后，将酶标板置于 37℃温育一定时间。之后弃去孔内液体，用洗涤缓冲液洗涤微孔板。再依次加入生物素化检测抗体、HRP 标记的亲和素，每次加入后都要进行温育和洗涤。＊后加入底物进行显色，加入终止液终止反应，以空白空调零，在 450nm 波长下依序测量各孔的吸光度（OD 值），根据标准曲线计算样品中 FTH1 的浓度。具体的温育时间、洗涤次数等操作细节因豪运国际而异。保存条件：6个月。
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