猪（Porcine）回肠炎抗体（Ileitis-Ab）ELISA检测豪运国际该豪运国际仅用于科研实验产品货号：DM-P7362产品规格：48/96T一、ELISA 检测原理ELISA（酶联免疫吸附测定）核心是抗原 - 抗体特异性结合 + 酶促显色反应，通过颜色深浅反映待测物浓度。常用类型及原理：1. 双抗体夹心法（测大分子抗原 / 蛋白）固相包被捕获抗体 → 加入样本（待测抗原）→ 结合酶标检测抗体 → 加底物显色 → 吸光度与抗原浓度正相关。2. 间接法（测抗体）固相包被抗原 → 样本中待测抗体结合 → 加酶标二抗 → 底物显色 → 吸光度与抗体浓度正相关。3. 竞争法（测小分子抗原 / 半抗原）待测抗原与酶标抗原竞争结合有限抗体 → 待测物越多，显色越浅 → 吸光度与浓度负相关。二、豪运国际的组成三、ELISA实验所需材料（一）豪运国际本身（核心）1. 预包被酶标板（96 孔）2. 标准品（梯度浓度）3. 酶结合物（酶标抗体 / 酶标抗原）4. 样本稀释液5. 洗涤液（浓缩液，使用前稀释）6. 显色底物液（A、B 液或单液）7. 终止液8. 封板膜 / 封板胶 （二）样本相关1. 待测样本（血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等）2. 样本处理试剂（视样本类型）：抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠等）蛋白酶抑制剂（如组织样本）裂解液、匀浆缓冲液等 （三）仪器设备1. 酶标仪（450 nm 为主，部分需双波长）2. 洗板机（推荐）或洗板瓶 / 排枪3. 移液器（0.5–10 μL、10–100 μL、100–1000 μL）4. 移液器吸头（带滤芯更佳）5. 涡旋振荡器6. 离心机（样本处理用）7. 恒温培养箱 / 水浴（37℃ 孵育用）8. 冰箱（2–8℃、-20℃） （四）耗材与辅助用品1. EP 管、冻存管2. 一次性手套、口罩3. 吸水纸 / 滤纸4. 计时器5. 去离子水 / 蒸馏水（用于洗涤液稀释）6. 废液缸、吸水纸 （五）可选 / 特殊实验材料1. 封板膜 / 封板胶2. 振荡器（微孔板摇床）3. 多道移液器（8/12 道）4. 加样槽5. 微孔板封口膜、铝箔（避光）四、试剂准备的注意事项1.所有试剂按说明书指定温度保存（2–8℃ 或 -20℃）2.避免阳光直射，酶结合物、底物需避光3.不同批号试剂不可混用4.加样前检查试剂是否浑浊、沉淀、变色，异常则弃用5.所有试剂开盖后尽快使用，剩余按要求保存五、结果计算（通用流程）1. 数据处理（1）扣除空白孔 / 本底孔吸光度（OD），得到校正 OD 值。（2）以标准品浓度为 X，校正 OD 为 Y，做标准曲线（常用四参数拟合 4PL）。 2.浓度计算（1）样本 OD 代入标准曲线，得到理论浓度 C₀。（2）若样本经稀释，＊终浓度：C=C0×稀释倍数2. 有效性判定（常见）（1）空白 OD 通常 ≤ 0.1；（2）标准曲线 R² ≥ 0.98；（3）质控（QC）在可接受范围；（4）样本 OD 超出曲线上限 / 下限时需重新稀释 / 浓缩复测。六、示例（双抗体夹心法）标准品浓度：0、10、20、50、100、200 pg/mL测得 OD：0.05、0.12、0.25、0.58、1.10、1.95校正后 OD：0、0.07、0.20、0.53、1.05、1.90拟合曲线后，某样本校正 OD=0.35 → 曲线读出 C₀≈30 pg/mL若样本稀释 5 倍，则＊终浓度 = 30 × 5 = 150 pg/mL。
猪（Porcine）口蹄疫病毒O型抗体（FMDV-O-Ab）ELISA检测豪运国际本豪运国际只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理豪运国际采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被口蹄疫病毒O型（FMDV-A）抗原的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中口蹄疫病毒抗体（FMDV-O-Ab）的存在与否。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 豪运国际保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到豪运国际的的＊佳检测效果。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。豪运国际组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无阴性对照0.5mL 0.5mL 无阳性对照0.5mL 0.5mL 无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释样本稀释液6mL3mL无底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00； 阴性对照孔OD值平均值≤0.15。2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.153. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性豪运国际性能1. 准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。5. 有效期：6个月免责声明1. 豪运国际仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
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