鸡（Chicken）皮质酮/肾上腺酮（CORT）ELISA检测豪运国际本豪运国际只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理豪运国际采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被皮质酮/肾上腺酮（CORT）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质酮/肾上腺酮（CORT）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 豪运国际保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。豪运国际组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480 pg/mL试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 豪运国际性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于0.1 pg/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 豪运国际仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Chicken Corticosterone (CORT) ELISA Kit instruction Intended useThis CORT ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of CORT in the sample, this CORT ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus CORT concentration. The concentration of CORT in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,30,60,120,240,480 pg/mlReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add Sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 4. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.5. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.6. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.7. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 1.0 pg/ml6. Standard curve Storage： 2-8℃.validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
人（Human）去乙酰化酶1（SIRT1）ELISA检测豪运国际本豪运国际只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理豪运国际采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被去乙酰化酶1（SIRT1）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的去乙酰化酶1（SIRT1）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品活性。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 豪运国际保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。豪运国际组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、7.5、15、30、60、120 U/mL试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 豪运国际性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0 U/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 豪运国际仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
兔（Rabbit）乙型肝炎表面抗体（HBsAb）ELISA检测豪运国际本豪运国际只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理豪运国际采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被乙型肝炎表面抗原的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中乙型肝炎表面抗体（HBsAb）的存在与否。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 豪运国际保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到豪运国际的的＊佳检测效果。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。豪运国际组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无阴性对照0.5mL 0.5mL 无阳性对照0.5mL 0.5mL 无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释样本稀释液6mL3mL无底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；4. 随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 1. 试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00； 阴性对照孔OD值平均值≤0.15。2. 临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.153. 阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性4. 阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性豪运国际性能1. 准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。3. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。5. 有效期：6个月免责声明1. 豪运国际仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
小鼠（Mouse）血管紧张素ІІ（Ang ІІ）ELISA检测豪运国际本豪运国际只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理豪运国际采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被血管紧张素ІІ（Ang ІІ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管紧张素ІІ（Ang ІІ）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 豪运国际保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。豪运国际组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480 pg/ml试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 豪运国际性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0 pg/mL。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 豪运国际仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Mouse angiotension Ⅱ (AngⅡ) ELISA Kit instruction Intended useThis AngⅡELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution chAnges the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of AngⅡin the sample, this AngⅡELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus AngⅡconcentration. The concentration of AngⅡin the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,30,60,120,240,480 pg/mlReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add Sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 4. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.5. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.6. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.7. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 1.0 pg/ml6. Standard curve Storage： 2-8℃.validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
淀粉含量检测豪运国际说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。货号：DM-SP10018规格：50T/48S产品内容：试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；标准品：粉剂×10mg支，4℃保存；临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，制备 10mg/mL 葡萄糖标准液。产品说明：淀粉是植物中糖的主要储存形式，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢都 有重要意义。利用80％乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开，进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖，采 用蒽酮比色法测定葡萄糖含量，即可计算淀粉含量。需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、玻璃比色皿、研钵、冰、浓硫酸（不允许快递）、 蒸馏水。操作步骤：一、淀粉提取：1 、称取约 0. 1g 样品于研钵中研碎，加入 1mL 试剂一，充分匀浆后转移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min ，3000g ，常温离心 5min ，弃上清，留沉淀。2 、沉淀中加入0.5mL 双蒸水，放入沸水浴中糊化 15min（盖紧，以防止水分散失）。3 、冷却后，加入 0.35mL 试剂二，常温提取 15min ，振荡 3-5 次。4 、加入 0.85mL 双蒸水，混匀，3000g ，常温离心 10min ，取上清液。5 、取上清液 100μL 加入 700μL 蒸馏水后即进行了八倍稀释测定。注：若稀释八倍后样品吸光度大 于 1.5 或小于 0.1 ，建议将样品再进行适当稀释或浓缩后测量。标准溶液准备：将10mg/mL 葡萄糖标准液进行二倍稀释得到 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、 0.00156mg/mL 标准溶液备用。二、测定操作表：1 、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 620nm ，蒸馏水调零。2 、调节水浴锅至 95℃。3 、工作液的配制：临用前在试剂三中加入 13.5mL 蒸馏水后，缓慢加入 76.5mL 浓硫酸，不断搅拌， 充分溶解，待用。4 、标准品测定：取 0.2mL 标准溶液（蒸馏水做空白）和 1mL 工作液至 EP 管中，95℃水浴 10 min （盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，在 620 nm波长下测定吸光度值 A 标准及A 空白。计算 ΔA=A 标准-A 空白。5 、样本测定：取0.2mL样本和1mL工作液至EP管中，95℃水浴10 min（盖紧，防止水分散失）， 自 然冷却至室温，在620 nm 波长下测定吸光度值A测定。ΔA´=A测定- A空白。三、淀粉含量计算：1 、标准曲线绘制：以 0.2 、0.1 、0.05 、0.025 、0.0125 、0.00625 、0.003125 、0.00156mg/mL 葡萄糖标准溶液为横坐 标，ΔA 为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程 y=kx+b ，将ΔA´代入方程得到 x（mg/mL）； 2、 淀粉含量计算：（1）、按照蛋白浓度计算淀粉含量(mg/mg prot)=x×稀释倍数×V 提取÷（Cpr×V 提取）=8x÷Cpr2 、按样本鲜重计算淀粉含量(mg/g 鲜重)=x×稀释倍数×V 提取÷W= 13.6x÷WV 提取：提取后体积，1.7 mL；Cpr：样本提取后蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；稀释倍数：8。注意事项：由于工作液具有强腐蚀性，请谨慎操作。本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
植物蔗糖含量检测豪运国际说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。货号：DM-SP10019规格：50T/48S产品内容:提取液：液体 100ml×1 瓶，4℃保存；试剂一：粉剂10mg×1支 ，4℃保存，临用前加1mL蒸馏水溶解，用水稀释10倍，备用，即1mg/mL。试剂二：液体2.5ml×1 瓶，4℃保存；试剂三：液体 40ml×1 瓶，4℃保存； 试剂四：液体 10ml×1 瓶，4℃保存； 试剂五：粉剂0.5g×1 瓶，常温保存。产品说明:蔗糖是植物光合作用的主要产物，也是糖分运输和储藏的主要形式。因此，测定蔗糖含量对于植物糖代谢具有重要意义。此外，蔗糖含量是饮料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等产品质量控制的重要指标之一。先用碱与样品共热，破坏其中的还原糖。然后在酸性条件下将蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，果糖进一步与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm 下有特征吸收峰。自备实验用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。操作步骤:一、 蔗糖的提取称取0.1~0.2g 样本，常温研碎，加入1mL 提取液，适当研磨后快速转移到离心管中，置于80℃ 水浴锅中10min，振荡3~5 次，冷却后，4000g，25℃离心10min，取上清，加入2mg试剂五，80℃脱色30min，再加入1mL 提取液，4000g，25℃离心10min，取上清液测定。二、 测定操作混匀，沸水浴 30min，冷却后 480nm 处蒸馏水调零，空白管、标准管和测定管分别记为 A1、A2 和 A3。三、 蔗糖含量计算：1、 按照蛋白质含量计算蔗糖含量(mg/mg prot)=(C 标准管)×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷（V1×Cpr）= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr此法需要自行测定蛋白浓度。2、按照样品质量计算蔗糖含量(mg/g 鲜重)=(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=2×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。C 标准管：标准管浓度，1mg/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，2mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。注意：当测定 OD480 超过 1.6 时，建议稀释后测定。
可溶性酸性转化酶（Soluble acid invertase, S-AI）豪运国际说明书可见分光光度法 货号：DM-SP10021 规格：50 管/24 样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：蔗糖转化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖 代谢关键酶之一。根据＊适 pH，Ivr 分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI）两种类型。AI 的＊适 pH 为 3～5。AI 分为可溶性 AI(S-AI)和细胞壁不溶性 AI（B-AI）两种类型。 S-AI 主要存在于细胞液泡或自由空间中，＊适 pH 为 4.5~5.0（酸性），通过降解液泡中蔗 糖，调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。测定原理：S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在 510nm有特征光吸收，在一定范围内 510nm 光吸收增加速率与 S-AI 活性成正比。 自备用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 试剂组成和配制：提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存;试剂一：液体 50mL×1 瓶，4℃保存;试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入25mL试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃ 保存;试剂三：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；粗酶液提取：按照组织质量（ g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。测定步骤和加样表：试剂名称 (μL）测定管对照管样本200200试剂一800试剂二800混匀， 37℃准确水浴 30min 后，95℃水浴 10min（盖紧，以防水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）试剂三500500混匀，95℃水浴 10min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀，510nm 处，蒸 馏水调零，记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘 以相应稀释倍数)，ΔA=A 测定-A 对照。S-AI 活性计算：标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0016x -0.001；x 为标准品浓度 (μg/mL），y 为吸 光值。（1）按蛋白浓度计算：单位的定义：37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。S-AI 活性 (μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T =20.8×(ΔA +0.001)÷Cpr（2）按鲜重计算：单位的定义：37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。S-AI 活性 (μg/min/g 鲜重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001)÷WV1：加入反应体系中样本体积，0.2mL；V2：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，30min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
葡萄糖含量检测豪运国际说明书 注意：正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定货号：DM-SP10020规格：50T/48S 产品简介：可见分光光度法葡萄糖不仅是细胞能量代谢的主要底物，而且其代谢中间产物是生物合成的重要底物。植物可通过光合作用产生葡萄糖。就哺乳动物而言，葡萄糖不仅是大脑神经系统、肌肉、脂肪组织等的唯一能源，而且与还原性辅酶、乳糖和乳脂的合成密切相关。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。产品内容：试剂一：葡萄糖 9mg×1支，4℃保存；临用前加入1ml蒸馏水充分溶解为50μmol/mL 葡萄糖溶液，用蒸馏水稀释为 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液 -20℃ 保存；试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；混合试剂的配制：使用前将试剂二和试剂三 1:1 等体积混合，用多少配多少。操作步骤：一、葡萄糖提取：1、组织的处理：称取约 0.1g 样本，加入 1mL 蒸馏水研磨成匀浆，置沸水浴中煮沸 10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，常温离心 10min，取上清液备用。2、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水）， 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3S，间隔 10S，重复 30 次），置沸水浴中煮沸 10 分钟（盖紧，防止水分散失），冷却后，8000g，25℃离心 10min，取上清液备用。二、测定操作表：1、分光光度计预热 30min。波长调至 505nm，蒸馏水调零。2、在 1.5mL 离心管中依次加入下列试剂：试剂（μL）空白管标准管测定管样本100试剂一100蒸馏水100混合试剂900900900混匀，置 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴中，保温 15min，于 505nm 波长处读取吸光度。 葡萄糖含量计算：1、按蛋白浓度计算葡萄糖含量（µmol/mg prot）＝C ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管)×V 样÷（Cpr×V样）＝0.5×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管)÷Cpr2、按样本鲜重计算葡萄糖含量（µmol/g 鲜重）＝C ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管) ×V 样÷（W÷V样总×V 样）＝0.5 ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管) ÷W3、按细菌或细胞数量计算葡萄糖含量（µmol/104 cell）＝C ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管) ×V 样÷（500÷V样总×V 样）＝0.001 ×(A 测定管－A 空白管)÷（A 标准管－A 空白管)C：葡萄糖溶液浓度，0.5µmol/mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V 样：加入的样本体积，100µL=0.1mL；V 样总：样本总体积，1mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞数量，500 万。4、若 A 测定管大于 1.5，稀释后进行实验。
大鼠（Rat）肌钙蛋白（Tn）ELISA检测豪运国际本豪运国际只能用于科学研究，不得用于医学诊断检测原理豪运国际采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被肌钙蛋白（Tn）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成＊终的黄色。颜色的深浅和样品中的肌钙蛋白（Tn）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品1. 酶标仪（450nm）2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3. 37℃恒温箱操作注意事项1. 豪运国际保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，＊终结果乘以5才是样本实际浓度。4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。5. 所有液体组分使用前充分摇匀。豪运国际组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、25、50、100、200、400 pg/ml试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3. 样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。结果判断 绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。 豪运国际性能1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。2. 灵敏度：＊低检测浓度小于1.0 pg/ml。3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。6. 有效期：6个月免责声明1. 豪运国际仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。 FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES. Rat troponin (Tn) ELISA Kit instruction Intended useThis Tn ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450 nm using a spectrophotometer. In order to measure the concentration of Tn in the sample, this Tn ELISA Kit includes a set of calibration standards. The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus Tn concentration. The concentration of Tn in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1. Standard microplate reader(450nm)2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.3. 37 ℃ incubatorPrecautions1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3. Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)Materials suppliedName96 determinations48 determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent6.0ml3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A6.0ml3.0mlChromogen Solution B6.0ml3.0mlStop Solution6.0ml3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Note: Standard (S0 → S5) concentration was followed by:0,25,50,100,200,400 pg/mlReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.3. Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C. 5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15 minutes at 37°C. Protect from light.7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.Calculation of results1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis. 2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper or statistical software. 3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration. 4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.5. The sensitivity by this assay is 1.0 pg/ml6. Standard curve Storage： 2-8℃.validity： six months. FOR RESEARCH USE ONLY; NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS! PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量豪运国际说明书微量法 货号：DM-W-A401 规格：100管/96样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括MDA。通过检测MDA的水平即可检测脂质氧化的水平。测定原理：MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在532nm有＊大吸收峰，进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量；同时测定600nm下的吸光度，利用532nm与600nm下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。试剂的组成和配置：提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；注意事项：临用前注意试剂一是否完全溶解，如未溶解，可以70℃加热，并振荡以促进溶解。MDA 提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。测定步骤：1、吸取0.3mL试剂一于1.5mL离心管中，再加入0.1mL样本, 混匀。2、95℃水浴中保温30min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心10min。3、吸取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中，测定532nm和600nm处的吸光度，记为A532 和A600，ΔA= A532-A600。MDA 含量计算：a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下1、血清（浆）中 MDA 含量的计算：MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=25.8×ΔA2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算（1）按照蛋白浓度计算MDA含量(nmol/mg prot)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=25.8×ΔA ÷Cpr需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定豪运国际。（2）按照样品质量计算MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)=25.8×ΔA ÷W(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.0516×ΔAV 反总：反应体系总体积， 4×10-4L；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。b.用96 孔板测定的计算公式如下1、血清（浆）中 MDA 含量的计算：MDA含量(nmol/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样=51.6×ΔA2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算（1）按照蛋白浓度计算MDA含量(nmol/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 样)=51.6×ΔA÷Cpr需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定豪运国际。（2）按照样品质量计算MDA含量(nmol/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W×V样÷V样总)=51.6×ΔA÷W(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：MDA含量(nmol/104)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)=0.1032×ΔAV 反总：反应体系总体积，4×10-4L；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×103L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.1 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。 技术支持电话：400-9681786电子邮件：dm_support@sina.com网址：lydqmuye.com生产厂家：豪运国际-追求健康,你我一起成长
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