离子结合型果胶(ISP)含量豪运国际说明书 分光光度法 50管/24样正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是许多高等植物细胞壁中含量＊丰富的多糖成分，其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。测定原理：利用带有螯合剂的酸溶液提取离子结合型果胶（ISP），采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应，生成物质在530 nm处有＊大吸收峰。需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。试剂的组成和配制：试剂一：液体50mL× 1瓶，4℃保存。试剂二：液体50mL× 1瓶，4℃保存。试剂三：标准液1mL× 1支，4℃保存。试剂四：液体5 mL× 1瓶，4℃保存；样品的前处理： 1、 细胞壁的提取：取约0.3g样本，加入1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL试剂一（去除淀粉）浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。2、 ISP的提取：称取烘干的CWM 3mg，加入1mL试剂二，充分匀浆(若烘干物质质地坚硬，可先研碎后再加入1mL试剂二匀浆，或者用匀浆器匀浆)。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm处，蒸馏水调零；试剂三和试剂四37℃预热10min以上；2、操作表：试剂名称（µL）空白管标准管对照管测定管待测样本100100试剂三100蒸馏水100100试剂四100100100 混匀 浓硫酸800800800800混匀95℃水浴5min后，530nm处读取吸光值，空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为A1、A2、A3和A4。若A大于2，需将待测样本用蒸馏水稀释（可稀释10倍或20倍）。空白管和标准管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。ISP含量计算：ISP含量(mg /g 干重)= (C标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数C标准：标准管浓度，0.05mg/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL； W：样本干重，g。注意：＊低检测限为50μg /g 干重
可溶性果胶(WSP)含量豪运国际说明书 分光光度法 50管/24样正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是许多高等植物细胞壁中含量＊丰富的多糖成分，其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。测定原理：利用酸溶液提取得到（WSP）可溶性果胶，采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应，生成物质在530 nm处有＊大吸收峰。需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。试剂的组成和配制：试剂一：液体50mL× 1瓶，4℃保存。试剂二：液体50mL× 1瓶，4℃保存。试剂三：标准液1mL× 1支，4℃保存。试剂四：液体5 mL× 1瓶，4℃保存；样品的前处理： 1、 细胞壁的提取：取约0.3g样本，加入1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL试剂一（去除淀粉）浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。2、 WSP的提取：称取烘干的CWM 3mg，加入1mL试剂二，充分匀浆(若烘干物质质地坚硬，可先研碎后再加入1mL试剂二匀浆，或者用匀浆器匀浆)。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm处，蒸馏水调零；试剂三和试剂四37℃预热10min以上；2、操作表：试剂名称（µL）空白管标准管对照管测定管待测样本100100试剂三100蒸馏水100100试剂四100100100 混匀 浓硫酸800800800800混匀95℃水浴5min后，530nm处读取吸光值，空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为A1、A2、A3和A4。若A大于2，需将待测样本用蒸馏水稀释（可稀释10倍或20倍）。空白管和标准管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。WSP含量计算：WSP含量(mg /g 干重)= (C标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数C标准：标准管浓度，0.05mg/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL； W：样本干重，g。注意：＊低检测限为50μg /g 干重
果胶酯酶（pectinesterase，PE）豪运国际说明书 (NaOH滴定法) 50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义果胶酯酶, 属果胶酶系,亦称为果胶酶、果胶甲酯酶、果胶氧化酶。催化水解果胶长链上的甲氧酯水解产生小分子物质果胶酸和甲醇, 从而增加果胶在水中的溶解度。广泛存在于高等植物和可以降解细胞壁的细菌和真菌中，起内源调控植物细胞壁上及细胞之间果胶含量的作用，在食品工业中具有及其重要的作用和开发前景。 测定原理果胶酯酶催化水解果胶分子释放H+，使反应体系的pH下降，用碱液维持体系的pH始终保持在7.8(酚酞指示剂维持在粉红色)，通过碱消耗的NaOH量反映果胶酯酶的活性。需自备的仪器和用品天平、研钵、离心机、烘箱。试剂的组成和配制提取液：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前每瓶加双蒸水100mL充分溶解。试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加少量蒸馏水溶解，然后转入500mL容量瓶，用蒸馏水定容至500mL。试剂二：液体×1瓶，4℃保存。易挥发，使用后及时用封口膜封口。试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂四：用蒸馏水将试剂三稀释5倍，得试剂四。样品处理 称取1g组织样品，加入2mL提取液冰浴充分研磨（研钵提前-20℃预冷10min，提取液提前4℃预冷。可以根据客户自己的样本特殊性，自行按比例调整），12000g、4℃离心15min，取全部上清液待测。测定操作1. 试剂一于37℃烘箱保温10min，样本全部提取上清（约2mL）分别转移至15 mL离心管或者试管中。2. 向样本上清中分别加入50μL试剂二，混匀。然后每管加入8 mL试剂一混匀，并用试剂四调节pH至7.8（粉红色）。3. 将上述各离心管或试管放置37℃烘箱60分钟。每隔20分钟用试剂四调节pH，使pH维持在7.8（粉红色）。记录所消耗的试剂四的体积V（mL）。计算公式酶活定义：每g组织每分钟消耗1μmol NaOH定义为一个酶活单位U。PE活性（U/g）= 20VF/(TW)= VF/(3W)V：滴定所消耗的试剂四的量，mL；T：反应时间，60 min；F：样品稀释倍数；W：样品质量，g注意事项1. 试剂一提前预热，保证酶反应速率。2. 实验前先做预实验，如果酶活力太高，适当调整样本稀释倍数，如将样品稀释2-5倍进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
果胶酶（pectinase）豪运国际说明书分光光度法50管/24样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义果胶酶（pectinase）是一类分解果胶质酶类的总称，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。测定原理果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS试剂反应生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。自备实验用品及仪器天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。试剂组成和配制提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存。试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；临用前加入12.5mL试剂一，50℃加热溶解，用不完的试剂4℃保存一周。试剂三：液体30mL×1瓶，4℃避光保存。酶液提取1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。3. 细胞培养液等：直接检测。测定操作表对照管测定管试剂二（µL）40040050℃水浴温育5min样本（µL）100煮沸样本（µL）100混匀，50℃水浴反应30min试剂三（µL）500500沸水浴5min，冰浴冷却终止反应，8000g，4℃，离心10min，取上清，蒸馏水调零，1mL玻璃比色皿测定540nm处吸光值A，△A=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。酶活性计算公式标准曲线：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x为标准品浓度，mg/mL；y为吸光值。1．按照蛋白浓度计算酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。果胶酶活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr2．按照样本质量计算酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每克样本每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。果胶酶活性（mg/h /g 鲜重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷W3. 按细胞数量计算酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每104细胞每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。 果胶酶活性（mg/h /104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量4．细胞培养液酶活性定义：在50℃，pH3.5条件下，每毫升培养液每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。果胶酶活性（mg/h /mL）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V样÷T=2.523×(ΔA+0.008)V反总：反应总体积，0.5mL；V样：反应中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h注意事项1. 试剂二若有沉淀析出，请置于50℃加热溶解。2. 测定之前请先做预实验，如果吸光值较高或较低，请用提取液做适当的稀释或者加大样本量，并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。3. 煮沸样本建议在沸水中煮沸10分钟，以将酶彻底灭活。
果胶裂解酶（pectinate lyases，PL）豪运国际说明书分光光度法50管/24样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义果胶裂解酶（EC4.2.2.10）是果胶酶的重要组成部分，是一种能降解植物细胞壁，导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶，来源比较广泛，主要来源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的纯化，纸浆的漂白和纺织品的生物精炼，在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。测定原理果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键，生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸，在235nm处有特征吸收峰。自备实验用品及仪器天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿、恒温水浴锅。试剂组成和配制提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存。试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。试剂三：液体15mL×1瓶，4℃保存。酶液提取1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。3. 培养液：直接测定。测定操作表对照管测定管试剂一（μL）600试剂二（μL）60040℃温育3min酶液（μL）100100混匀，40℃反应30min试剂三（μL）300300混匀，对照管调零，1mL石英比色皿测定235nm处吸光值A。酶活性计算公式1. 组织中PL活性（1）按照蛋白浓度计算酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。PL活性（nmol/min/mg prot）= A÷（ε×d）×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 64.1×A÷Cpr（2）按照样本质量计算酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。PL活性（nmol/min/g 鲜重）= A÷（ε×d）×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T= 64.1×A÷W2. 细胞PL活性酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。PL活性（nmol/min/104cell）= A÷（ε×d）×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T = 64.1×A÷细胞数量3. 培养液PL活性酶活性定义：在40℃，pH5.5条件下，每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。PL活性（nmol/min/mL）= A÷（ε×d）×V反总÷V样÷T= 64.1×Aε：不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数：5200L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
共价结合型果胶(CSP)含量豪运国际说明书 分光光度法 50管/24样正式测定前取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是许多高等植物细胞壁中含量＊丰富的多糖成分，其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。测定原理：利用带有螯合剂的碱溶液提取共价结合型果胶（CSP），采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应，生成物质在530 nm处有＊大吸收峰。需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不允许快递）、研钵和蒸馏水。试剂的组成和配制：试剂一：液体50mL× 1瓶，4℃保存。试剂二：液体50mL× 1瓶，4℃保存。试剂三：标准液1mL× 1支，4℃保存。试剂四：液体5 mL× 1瓶，4℃保存；样品的前处理： 1、 细胞壁的提取：取约0.3g样本，加入1mL 80％乙醇，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（涡旋振荡2min左右，4000g 25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL试剂一（去除淀粉）浸泡15小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，将沉淀干燥，称重得细胞壁物质（CWM）。2、 CSP的提取：称取烘干的CWM 3mg，加入1mL试剂二，充分匀浆(若烘干物质质地坚硬，可先研碎后再加入1mL试剂二匀浆，或者用匀浆器匀浆)。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm处，蒸馏水调零；试剂三和试剂四37℃预热10min以上；2、操作表：试剂名称（µL）空白管标准管对照管测定管待测样本100100试剂三100蒸馏水100100试剂四100100100 混匀 浓硫酸800800800800混匀95℃水浴5min后，530nm处读取吸光值，空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为A1、A2、A3和A4。若A大于2，需将待测样本用蒸馏水稀释（可稀释10倍或20倍）。空白管和标准管只要做一管，每个测定管需设一个对照管。CSP含量计算：CSP含量(mg /g 干重)= (C标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数C标准：标准管浓度，0.05mg/mL；V1：加入样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL； W：样本干重，g。注意：＊低检测限为50μg /g 干重
多聚半乳糖醛酸酶（ploygalacturonase，PG）豪运国际说明书分光光度法50管/24样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是一种细胞壁结合蛋白，可以催化果胶分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，参与果胶的降解，使细胞壁结构解体，导致果实软化，与果实成熟、叶和花的脱落、病原物防御，细胞伸展发育以及木质化有关，在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域具有较高的研究价值。测定原理多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与DNS试剂反应生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。自备实验用品及仪器天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。试剂组成和配制提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存。试剂二：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。酶液提取1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后16000g，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。3．培养液：直接检测。测定操作表对照管测定管样本（μL）100煮沸样本（μL）100试剂一（μL）400蒸馏水（μL）40040℃水浴30min试剂二（μL）500500沸水浴5min，冰浴或自来水冷却，蒸馏水调零，1mL玻璃比色皿测定540nm处吸光值A，△A=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。酶活性计算公式标准曲线：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x为标准品浓度，mg/mL；y为吸光值。1．按照蛋白浓度计算酶活性定义：在40℃，pH6.0条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。PG活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷（V样×Cpr）÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr2．按照样本质量计算酶活性定义：在40℃，pH6.0条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。PG活性（mg/h/g 鲜重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷W3．按液体体积计算酶活性定义：在40℃，pH6.0条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。PG活性（mg/h/mL）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V样÷T=2.523×(ΔA+0.008)4. 按细胞数量计算酶活性定义：在40℃，pH6.0条件下，每104个细胞每小时分解果胶酸产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。PG活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量 V反总：反应总体积，0.5mL；V样：反应中样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h注意事项煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸10分钟，以将酶彻底灭活。
吲哚乙酸氧化酶活性测定豪运国际说明书 分光光度法 50T/48S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。测定原理：在无机酸存在情况下，吲哚乙酸能与FeCl3作用，生成红色螯合物，该物质在530nm处有＊大吸收峰，酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、1.5mL离心管、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保存。试剂二：液体10mL×1瓶，4℃保存。试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。试剂四：液体10mL×1瓶，4℃保存。试剂五：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。试剂六：液体50mL×1瓶，4℃保存。临用前吸取1mL试剂五加入试剂六中混匀，待用，避光保存粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。3. 血清等液体：直接测定。测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到530 nm，蒸馏水调零。2. 试剂二、试剂三、试剂四置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温20min。3. 取1.5mL EP管若干，操作表如下：标准管测定管试剂二（μL）4040试剂三（μL）4040试剂四（μL）8080样本上清液（μL）040试剂一（μL）240200充分混匀后置于30°恒温水浴中，保温反应30min。实际六（μL）800800充分混匀，置于30℃黑暗水浴保温显色30min。取1000μL显色后呈红色的反应液于1mL比色皿中，用分光光度计测定530nm处OD值，标准管记为A1，测定管记为A2注意：标准管只需做一次IAA氧化酶活性计算公式：a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下IAA标准曲线公式：y = 1.334x + 0.025 R2 = 0.998 （x为IAA浓度，mmol /L；y为吸光值）（1） 按蛋白浓度计算酶活定义：从开始时加入的IAA量减去酶作用后残留的IAA含量，即得被酶所催化的IAA含量。以每mg酶蛋白在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。 U（μmol/h/mg prot）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V样÷（V样×Cpr）÷T=1.5×（A1-A2）÷Cpr（2） 按样本鲜重计算酶活定义：以每g样本在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。U（μmol/h/g 鲜重）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V样÷(V样÷V样总×W) ÷T=1.5×（A1-A2）÷W（3） 按细胞数量计算酶活定义：以每1万个细胞在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。 U（μmol/h/104 cell）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V样÷(V样÷V样总×W) ÷T=1.5×（A1-A2）÷细胞数量（4） 按液体体积计算酶活定义：以每mL酶液在1h内分解破坏的吲哚乙酸量表示酶活力大小。U（μmol/h/mL）=[(A1-0.025) ÷1.334-(A2-0.025) ÷1.334] ×V样÷(V样÷V样总) ÷T=1.5×（A1-A2）V样总：上清液总体积，1mL；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g，T：反应时间，0.5h。注意事项：1. ＊低检出限为0.01μmol/mL。
维生素B1（Vitamin B1，VB1）豪运国际说明书 分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义维生素B1（Vitamin B1）是构成脱羧辅酶的主要成分，参与细胞代谢中的三羧酸循环，是维持机体正常代谢必须的水溶性维生素，在生物体能量代谢中有重要的作用。测定原理VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝，在704nm有特征吸收峰。自备实验用品及仪器天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。试剂组成和配制 提取液：液体35mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体1mL×1瓶，4℃保存。试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。试剂三：液体5mL×1瓶，4℃避光保存。试剂四：液体12mL×1瓶，4℃保存。试剂五：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。样本处理1. 组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g离心10min，取上清测定。3. 血清：直接测定。 测定操作空白管测定管样品（μL）100试剂一（μL）100试剂二（μL）8080试剂三（μL）100100充分混匀，80℃反应10min提取液（μL）8080试剂四（μL）220220试剂五（μL）120120H2O（μL）300300充分混匀，静置20min，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定704nm处吸光值，记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管。计算公式标准曲线：y = 0.017x+0.0031，R2 = 0.9991；x为标准品浓度：μg/mL；y为△A（A测定管-A空白管）1. 按照蛋白含量计算VB1含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr = 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr2. 按照样本质量计算VB1含量（μg/g鲜重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V样总） = 58.8×（△A-0.0031）÷ W3. 按照细胞数量计算VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（细胞数量÷V样总） = 58.8×（△A-0.0031）÷ 细胞数量4. 按照液体体积计算VB1含量（μg/mL）=（△A-0.0031）÷ 0.017 = 58.8×（△A-0.0031）V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g注意事项1. 若测定结果中吸光值超过1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。2. 蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。3. 显色完成后立即进行测定。4. 标准曲线线性范围为0.1-10μg/mL。
维生素B6（Vitamin B6，VB6）豪运国际说明书 分光光度法 50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义维生素B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，在细胞中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。测定原理VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在390nm有特征吸收峰。自备实验用品及仪器天平、研钵、离心机、可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、蒸馏水。试剂组成和配制 提取液：液体35mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体1mL×1瓶，4℃保存。试剂二：液体12mL×1瓶，4℃保存。试剂三：液体18mL×1瓶，4℃避光保存。试剂四：液体18mL×1瓶，4℃避光保存。样本处理1. 组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定（动物组织等蛋白含量较高的样本建议离心20-30分钟）。2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm离心10min，取上清测定。3. 血清：直接测定。 测定操作空白管测定管样品（μL）200试剂一（μL）200试剂二（μL）200200试剂三（μL）300300试剂四（μL）300300充分混匀，25℃反应20min，于1mL玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定390nm处吸光值，记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。计算公式标准曲线：y = 0.3635x+0.0205，R2 = 0.99861. 按照蛋白含量计算VB6含量（μg/mg prot）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×Cpr） = 13.76×（△A - 0.0205）÷ Cpr2. 按照样本质量计算VB6含量（μg/g）=（△A - 0.0205）÷ 0.36359 ×V反总÷（V样×W÷V样总） = 13.76×（△A - 0.0205）÷ W3. 按照细胞数量计算VB6含量（μg/104 cell）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总） = 13.76×（△A - 0.0205）÷ 细胞数量4. 按照液体体积计算VB6含量（μg/mL）=（△A - 0.0205）÷ 0.3635×V反总÷V样 =13.76×（△A - 0.0205）V反总：反应总体积，1mL；：V样：加入样本体积，0.2mL；V样总：加入提取液体积，1mL； Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g注意事项1. 若测定结果中吸光值超过1，请将样本稀释后进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。2. 蛋白浓度较高的样品，比如动物组织，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。3. 显色完成后立即进行测定。
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