土壤全氮含量测定一．试剂配制1、标准溶液盐酸标准溶液[c (HCl)=0.1000 mol/L]，移取9 mL 浓盐酸（盐酸浓度36%～38%）用蒸馏水稀释并定容至1000 mL容量瓶，摇匀，用无水碳酸钠进行标定。无水碳酸钠标定方法：取50mL蒸馏水，加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配置好的盐酸溶液滴定至溶液由变为暗红色，消耗盐酸体积记为V0；再准确称取经300℃烘干1小时的无水碳酸钠0.2g，精确至0.0001，记为m，溶于少量蒸馏水中定容至50mL，加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配置好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸3分钟，冷却后继续滴定至溶液呈暗红色，消耗盐酸体积记为V。C（HCl）=m/[(V-V0)*0.05299],其中C（HCl）单位为mol/L。2、40%氢氧化钠溶液1000 ml（400 g/L）400g氢氧化钠溶解于1000mL无氨蒸馏水中；3、2%浓度硼酸溶液2000 ml （20g/L）分析纯硼酸40g溶于2000ml无氨蒸馏水中；4、甲基红-溴甲酚绿混合指示剂A：称取0.1g 甲基红，用无水乙醇定容至100 ml；B：称取0.1g 溴甲酚绿，用无水乙醇定容至100 ml. 临用时按照A:B=1:5混匀。取10ml加入1000ml硼酸溶液中。5、高锰酸钾溶液：2.5g高锰酸钾溶于50mL蒸馏水中。6、1:1硫酸溶液：100mL浓硫酸缓慢加入100ml蒸馏水中，边加边搅拌。二．样品消解1. 称取风干土样过40目筛的土样约0.5g（记录质量w），加入消化管中，同时取空消化管两支，分别往每管中加入1mL高锰酸钾溶液，轻轻晃动消化管，慢慢加入2mL1:1硫酸溶液，轻轻晃动消化管，室温静置5min；2. 加0.5g还原铁粉于消化管底部，尽量保证不沾壁，轻轻晃动消化管后室温静置10min；3. 将20支消化管全部置于石墨消解仪上，盖好盖子，打开废气回收系统以及石墨消解仪，温度设置为：直线加热100℃，40min；4. 取出消化管冷却后开盖，每管中加入加速剂2g，用移液管加入10mL浓硫酸，摇匀，重新放置在消解仪上，盖好盖子，温度设置为：曲线加热100℃，10min；200℃，10min；350℃，30min；400℃，1h；观察样本呈现黄绿色即为消解完全，否则，继续加热消解至样本呈黄绿色。5. 取出消化管冷却至室温，切勿在样品冷却之前开盖。6. 关闭石墨消解仪，待样品冷却后关掉废气回收系统。三．全氮测定1. 将滴定酸桶，硼酸桶，碱桶，蒸馏水桶管路按照标示插好（滴定酸桶的管子应插到底部），将硼酸桶，碱桶，蒸馏水桶的液位检测插好。2. 打开定氮仪与循环水系统，进入清洗界面，先进行两次硼酸清洗管路，再进行一次换酸清洗，一次碱管路清洗。3. 装一只空的消化管，关好防护门。点击【测试】菜单系统自动进入操作模式界面，选择【自动测试】，常规，设置参数为：样品编号；样品重量：0.000g。滴定酸浓度：标定好的盐酸浓度(mol/L)；空白值：0.000mL；蛋白系数：样品固定的转换系数。硼酸：15ml；稀释水：20mL；碱液：0mL；蒸馏：5min；设置完成后，点击【确定】即可进入自动测试功能。4. 测试完成后打印测定结果。5. 打开安全门，戴棉质手套取出消化管，放入样品空白管，关好防护门。点击【测试】菜单系统自动进入操作模式界面，选择【自动测试】，常规，碱液参数设置为40mL，其余参数同步骤3，重复步骤3。6. 样品测定：设置参数为：样品编号；样品重量：称取的样品实际质量，g。滴定酸浓度：标定好的盐酸浓度(mol/L)；空白值：两支空白管滴定用酸量的平均值，mL；蛋白系数：样品固定的转换系数。硼酸：15ml；稀释水：20mL；碱液：40mL；蒸馏：5min；设置完成后，点击【确定】即可进入自动测试功能。7. 测试完成后打印测定结果。8. 进行仪器清洗，然后关闭循环水系统及定氮仪，然后清洁仪器。四．注意事项1. 禁止使用边缘有缺口，或者有裂缝的消化管进行消解，消解时盖子放置好，以免废气泄露，消解仪工作状态尽量不要靠近仪器，但是要经常观察管内变化，若出现异常情况，立即断电。2. 开始蒸馏时，消化管中液体的总体积以不超过总体积的1/3。3. 拿取消化管时，注意高温烫伤。放置消化管时，左右旋转几下，确保消化管与蒸馏头密封。4. 每日做完实验要用洗瓶冲洗蒸馏头残余碱液，仪器前部的槽皿中，如果积有液体，请擦洗干净。5. 为了延长防溅装置的使用寿命，请每天工作结束后清洗两次左右：即消化管加水150mL空蒸5分钟。（空蒸仪器把加碱量设置为“0”）。6. 关机前，需将接收杯内液体排净，仪器使用结束后要关闭水源、电源，仪器上要放置一空消化管（防止防溅装置内残留液体流到仪器上）。
天冬酰胺合成酶(asparagine synthetase，AS)活性测定豪运国际说明书 分光光度法 50管/48样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：天冬酰胺合成酶是广泛存在于生物体内的一类氨基转移酶，催化谷氨酞胺的氨基向天冬氨酸转移。当植物处于氨毒时天冬酞胺的形成是一种解毒反应。测定原理：AS催化L-天冬酰胺水解成L-天冬氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。需自备仪器和用品：台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一×1瓶，60 mL，4 ℃保存；试剂二×1瓶，20 mL，4 ℃保存；试剂三×1瓶，30 mL，常温保存；试剂四×1瓶，10 mL，常温保存；试剂五×1瓶，6 mL，常温保存；试剂六×1瓶，6 mL，常温避光保存。粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。2、样品测定（在EP中加入下列试剂）：试剂名称（uL）测定管对照管样本25蒸馏水25试剂一100100试剂二400400混匀，37℃水浴1 小时试剂三525525混匀，8000 g，25℃离心10 min；取上清液，在EP管中加入下列试剂 上清液650650试剂四150150试剂五100100试剂六100100混匀，室温静置15min，420nm处读取吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。 计算：标准条件下测定的回归方程为y = 0.662x -0.0434；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。。1、血清（浆）AS活性单位定义：每mL血清（浆）每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。AS（μg/h/mL）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷V样÷T=31.722×(ΔA+0.0434)2、组织、细菌或细胞中AS活力的计算:（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。AS活力（μg/h/mg prot）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(V样×Cpr)÷T =31.722×(ΔA+0.0434) ÷Cpr（2）按样本鲜重计算：单位的定义：每g组织每小时产生1μg氨定义为一个酶活力单位。AS活力（μg/h/g 鲜重）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =31.722×(ΔA +0.0434) ÷W（3）按细菌或细胞密度计算：单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1μg 氨定义为一个酶活力单位。AS活力（μg/h/104 cell）＝(ΔA+0.0434) ÷0.662×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0634×(ΔA+0.0434)T：反应时间，1h； V反总：反应体系总体积：0.525mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500万
水土中亚硝酸盐含量测定豪运国际说明书 分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义亚硝酸盐广泛存在于水体和土壤中，不仅是有机氮分解的重要中间产物，也可能来自污染。人体摄入过量后，可诱发消化系统癌变。测定原理在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰。自备实验用品及仪器天平、常温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。试剂组成和配制提取液：液体100mL×1瓶，室温保存。试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。试剂二：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。样品处理1. 土壤样品：准确称取过筛后的土壤约1g，加入2 mL 提取液，室温震荡1h，8000g，25℃离心15min，静置，待其分层后，取上清液待测。2. 水样：直接检测；如果浑浊，可以离心后再测定。测定步骤和操作表空白管测定管样品（µL）1000试剂一（µL）500500试剂二（µL）500500H2O1000混匀，25℃静置15min，1mL玻璃比色皿，空白管调零，测定A540 注意：空白管只需测定一次。亚硝酸盐含量计算标准曲线回归方程为：y= 0.011x + 0.0216，R2= 0. 9991 V样总：加入提取液体积，2mL；V反总：反应总体积，2 mL；V样：反应中样品体积，1mL； W：样品质量，g注意事项1. 豪运国际2-8℃保存。2. 试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。3. ＊低检出限为1.97μmoL /L。
食品中亚硝酸盐含量测定豪运国际说明书 分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义在食品中，亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更安定，在食品加工业中作为保色剂，以维持肉制品的良好外观，并防止肉毒梭状芽孢杆菌的产生，提高食用肉制品的安全，但是人体长期摄入亚硝酸盐过量的食品，可诱发消化系统癌变。测定原理在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰。自备实验用品及仪器天平、研钵或匀浆器、水浴锅、分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。试剂组成和配制提取液一：液体50 mL×1瓶，室温保存。提取液二：液体50 mL×1瓶，室温保存。提取液三：液体50 mL×1瓶，室温保存。提取液四：粉剂 100 mg ×1支，室温保存。试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。试剂二：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。样品处理称取样品约0.2g鲜重或0.05g干重，破碎，加入0.5 mL 提取液一，沸水浴15min，冷却至室温，加入0.5 mL提取液二，震荡摇匀，加0.5 mL 提取液三，用镊子加少量粉剂四（约1 mg），静置30min，25℃，8000g离心15 min，取上清液待测。。测定步骤和操作表测定管空白管蒸馏水（µL）350样品（µL）350试剂一（µL）325325试剂二（µL）325325混匀，25℃静置15min，于微量石英比色皿/96孔板中检测540nm处吸光值A。 △A=A测定 - A空白注意：空白管只需测定一次。亚硝酸盐含量计算标准曲线回归方程为：y=0.234x + 0.0002，R2= 0. 999 x为标准品亚硝酸钠浓度（μg/ml） y为吸光值A。NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.234×V样÷（V样÷V样总×W）×0.6668 =（△A-0.0002）÷0.234×1.5×0.6668÷W =4.27×（△A-0.0002）÷WV样总：加入提取液体积，1.5 mL； V样：反应中样品体积，0.35mL；W：样品质量，g。注意事项1. 豪运国际2-8℃保存。2. 试剂对人体有一定的危害，请穿实验服，戴手套操作。3. 若检测出得OD值在标准曲线范围外，请将样品进行适当的浓缩或稀释（A540 <0.09浓缩，A540 > 1.5 适当稀释）。4. ＊低检出限为0.5μg/g。
脲酶（Urease， UE）测定豪运国际说明书 分光光度法50管/24样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。UE活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关，反应了氮素状况。测定原理：利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1ml比色皿、研钵、冰、和蒸馏水。试剂的组成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，临用前加入5mL蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂4℃保存；试剂二：液体12mL×1瓶，4℃保存；试剂三A液：液体×1支，4℃保存；试剂三B液：液体×1瓶，4℃保存；临用前将A液倒入B液中混合，待用；用不完的试剂4℃保存一周；试剂四：液体5mL×1瓶，4℃保存；样本的前处理： 1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。测定步骤：1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至578nm，蒸馏水调零。2、酶促反应试剂名称测定管对照管样本（μL）2020试剂一（μL）90蒸馏水（μL）90试剂二（μL）190190混匀，放入37℃水浴1h后，10000g 25℃离心10min，取上清液。2、将上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）。3、测氨量（在1ml比色皿中加入下列试剂）测定管对照管稀释后的上清液（μL）400400试剂三（μL）7575试剂四（μL）7575充分混匀，室温放置20min蒸馏水（μL）450450混匀，于578nm处，蒸馏水调零，读吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。UE活力计算标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。1、血清（浆）UE活力的计算:单位的定义：每mL血清（浆）每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。UE活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷V样÷T=27.32×(ΔA -0.0373)单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。2、组织、细菌或细胞中1μg NH3-N活力的计算:（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。UE活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(V样×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr（2）按样本鲜重计算：单位的定义：每g组织每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。UE活力（μg/min/ g 鲜重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W（3）按细菌或细胞密度计算：单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。UE活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0546×ΔA10：稀释倍数；T：反应时间，60min； V反总：反应体系总体积：0.3mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500万。
尿素氮（BUN）豪运国际说明书分光光度法50T/48S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物，在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。测定原理样本中尿素氮在氯化高铁一磷酸溶液中与二乙酰一肟和硫胺脲共煮，生成一种红色的二嗪化合物，其颜色的深浅与尿素氮含量成正比，采用二乙酰一肟法测定尿素氮含量。自备实验用品及仪器天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。试剂组成和配制 试剂一：液体6mL×1瓶，4℃避光保存，试剂二：液体60mL×1瓶，4℃避光保存。样品处理1. 组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，匀浆后于25℃，10000g离心10min，取上清待测。2. 细胞：按照细胞数量（104个）：蒸馏水体积（mL ）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL蒸馏水），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。3. 血清或其它液体：直接检测。测定操作空白管测定管样品（μL）40H2O（μL）40试剂一（μL）100100 试剂二（mL）10001000混匀，沸水浴10min，冷却后，540nm下测定吸光值。△A=A测定-A空白。空白管只要做一管。尿素氮含量计算：标准条件下测定回归方程为y =2.048x + 0.0229，R2 = 0.9943；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值。1、按照血清（浆）或者细胞培养液体积计算尿素氮含量(mg/mL)= (△A-0.0229)÷2.048=0.4882×(△A-0.0229)2、按照样本质量计算尿素氮含量mg/g鲜重)= (△A-0.0229)÷2.048×V样总÷W=0.4882×(△A-0.0229)÷W3、按照蛋白浓度计算尿素氮含量(mg/mg prot)= (△A-0.0229)÷2.048÷Cpr=0.4882×(△A-0.0229) ÷CprV样总：加入提取液体积，1 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性测定豪运国际说明书 分光光度法 50管/48样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：GLS（EC 3.5.1.1）是酰胺基水解酶，催化天冬酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。测定原理：GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其酶活性。需自备仪器和用品：台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一×1瓶，60 mL，4 ℃保存；试剂二×1瓶，20 mL，4 ℃保存；试剂三×1瓶，30 mL，常温保存；试剂四×1瓶，10 mL，常温保存；试剂五×1瓶，6 mL，常温保存；试剂六×1瓶，6 mL，常温避光保存。粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。2、样品测定（在EP中加入下列试剂）：试剂名称（uL）测定管对照管样本25蒸馏水25试剂一100100试剂二400400混匀，37℃水浴1 小时试剂三525525混匀，8000 g，25℃离心10 min；取上清液，在EP管中加入下列试剂 上清液650650试剂四150150试剂五100100试剂六100100混匀，室温静置15min，420nm处读取吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。对照管只要做一管。注意：1、试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。2、ΔA（A测定管-A对照管）若出现负值，可能是酶活性较低，可将反应时间1h延长到2h，相应的在计算公式中除以2。酶活性计算：标准条件下测定的回归方程为y =3.8488x +0.0057，R2 = 0.9983；；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值A。1、血清（浆）GLS活性单位定义：每mL血清（浆）每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS（nmol /min /mL）＝ (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V反总÷V样÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057) 2、组织、细菌或细胞GLS活性（1）按样本蛋白浓度计算：单位定义：每mg蛋白质每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS（nmol /min /mg prot）＝ (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)÷Cpr（2）按样本鲜重计算：单位定义：每g组织每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS（nmol/min/g 鲜重）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)÷W（3）按细菌或细胞密度计算单位定义：每1万个细菌或细胞每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定义为一个酶活力单位。GLS（nmol/min/104 cell）＝(ΔA-0.0057) ÷3.8488×V反总÷(500× V样÷V样总)÷T×1000=0.3637×(ΔA-0.0057)V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，60min；V反总：反应体系总体积，1.05mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.025mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万; 1000，μmol到nmol换算系数。
谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase，GDH）豪运国际说明书 分光光度法 50管/48样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义： GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成，在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。测定原理：GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH，生成谷氨酸和NAD+，引起340nm吸光度下降。通过测定340nm吸光度的下降速率，计算GDH活性。需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；粗酶液提取：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。血清（浆）样品：直接检测。测定步骤：1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。2、 样本测定（1）在试剂二中加入25mL试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用（配好后12h内用完）；（2）取0.05mL样本和0.95mL工作液于1mL比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。GDH活性计算：1、血清（浆）中GDH活力的计算:单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。GDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T=643×ΔA2、组织、细菌或细胞中GDH活力的计算:（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。GDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr（2）按样本鲜重计算：单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。GDH（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=643×ΔA÷W（3）按细菌或细胞密度计算：单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。GDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T=1.286×ΔAV反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
谷氨酸合成酶（Glutamate synthase，GOGAT）豪运国际说明书 分光光度法 50管/48样正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义： GOGAT分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同构成GS/GOGAT循环，参与氨同化的调控。测定原理：GOGAT催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸，形成两分子的谷氨酸；同时NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。试剂组成和配制：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；粗酶液提取：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。测定步骤：1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。2、 样本测定（1）工作液的配制：在试剂二中加入25mL试剂一充分溶解混匀，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；现配现用（配好后3h内用完）；（2）取0.1mL样本和0.9mL工作液于1mL比色皿中，混匀，加工作液的同时开始计时，在340 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。GOGAT活性计算：（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。GOGAT（nmol /min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V×样Cpr) ÷T=321×ΔA÷Cpr（2）按样本鲜重计算：单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。GOGAT（nmol /min /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321×ΔA÷W（3）按细菌或细胞密度计算：单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol NADH定义为一个酶活力单位。GOGAT（nmol /min /104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.642×ΔAV反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。
一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定豪运国际说明书分光光度法50管/48样注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。测定原理NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2—，在酸性条件下，NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。自备实验用品及仪器天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。试剂组成和配制提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。试剂二：液体15mL×1瓶，4℃避光保存。（用之前60℃加热震荡15min）样品处理1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。3. 体液和培养液等其它液态样品：直接测定。测定步骤和操作表空白管测定管样品（μL）400提取液（μL）400试剂一（μL）250250试剂二（μL）250250混匀，室温静置15min， 1mL玻璃比色皿，测定A550，ΔA=A测定-A空白 NO含量计算标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986 1、组织样品：（1）按样本质量计算NO含量（μmoL/g 鲜重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反总÷（V样÷V样总×W）×10-3 = 0.14×（ΔA +0.0103）÷W（2）按样本蛋白浓度计算NO含量（μmoL/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反总÷（V样×Cpr）×10-3 = 0.14×（ΔA +0.0103）÷Cpr2、细胞：NO含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量）×10-3= 0.14×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）3、其他样品：NO含量（μmoL/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V反总÷V样 = 140×（ΔA +0.0103）V反总：反应总体积，0.9mL；V样：反应中样品体积，0.4mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/mL
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