WB实验一图搞定全步骤~
你是不是也对着Western Blot实验步骤一头雾水？别慌！这张流程图帮你理清从“蛋白提取”到“条带曝光”的全过程👇
🔹 第一步：提取蛋白 选择合适的裂解液去裂解细胞/组织 → 低温+抑制剂保护
🔹 第二步：蛋白定量 BCA法或其他蛋白定量法检测蛋白浓度 → 充分变性
🔹 第三步：电泳分离 上样 → 跑胶（根据分子量大小分离）
👉 注意胶浓度、电压、避免产热过多
🔹 第四步：转膜 蛋白条带转印到PVDF/NC膜
💡 小贴士：膜要活化、无气泡、冰浴降温，转完用丽春红检查效率
🔹 第五步：封闭 + 抗体孵育 封闭非特异位点 → 一抗（4°C 过夜）→ 二抗（室温1-2h）
🧴 封闭液选牛奶或BSA，使用一抗和二抗前都要先洗洗洗！
🔹 第六步：曝光检测 加化学发光底物（ECL）→ 二抗上的酶激发荧光 → 曝光或成像仪采集条带
⚠️ ECL现配现用，控制曝光时间，保持膜湿润
❌ 出现非特异条带？优化抗体浓度或封闭条件吧～
保存这张图，实验再也不迷路🧠
@你身边正在苦战WB的小伙伴，一起变高手💪
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